PCR實驗室原則上為試劑準備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域并設(shè)有專用走廊,各工作區(qū)域應設(shè)緩沖間,工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區(qū)應是分隔獨立的,各工作區(qū)有明顯的標志,不能直通,如果緊密相連,需安裝物品傳遞窗。進入各工作區(qū)域必須嚴格按照單一方向進行,即從試劑準備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)。
各區(qū)域之間應具備單向的實驗工藝流、物流、人流與氣流,形成單向流程的保護屏障,避免實驗之間的相互干擾,防止氣溶膠擴散對實驗過程造成污染。為避免各個實驗區(qū)域交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式,嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。
各區(qū)主要功能及設(shè)備:
1、試劑準備區(qū)
主要進行試劑的制備、分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送至該區(qū),不得經(jīng)過其它區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑。
主要設(shè)備:天平、冰箱、離心機、加樣器、振蕩器等。
氣流壓力的控制,本區(qū)并沒有嚴格的要求。
2、樣品制備區(qū)
主要進行樣品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。
主要設(shè)備:冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴等。
壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為正壓,以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。
3、擴增區(qū)
主要進行DNA擴增。此外,已制備的DNA模板 (來自樣品制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑準備區(qū))制備成反 應混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。
主要設(shè)備:擴增儀、冰箱、離心機、加樣器等。
壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。
4、擴增產(chǎn)物分析區(qū)
主要進行擴增產(chǎn)物的測定。
主要設(shè)備:酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等。
壓力梯度的要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。